اليكسا Fluor® الأصباغ يمتد المرئي والأشعة تحت الحمراء الطيف القسم 1.3 نظرة عامة على اليكسا Fluor® الأصباغ الأصباغ اليكسا Fluor® تنتج تقارن مشرق للغاية وصامد (اليكسا Fluor® استرات النشطة ومجموعات لوصفها البروتينات والأحماض النووية الجدول 1.4. واليكسا Fluor® صبغ سلسلة-لاحظ 1.1). الأصباغ اليكسا Fluor® تشترك عدة سمات هامة، بما في ذلك: امتصاص قوي في موجات من الانتاج القصوى من مصادر الإثارة المشتركة مضان مشرق وصامد بشكل غير عادي من bioconjugates بهم للذوبان في الماء الصالح الذي يجعل رد الفعل الأصباغ سهلة لتصريف وتقارن مقاومة لهطول الأمطار وتجميعها حساسية من امتصاص وانبعاث أطيافها لدرجة الحموضة على طائفة واسعة أطياف جيدا متباينة، وتوفير العديد من الخيارات للكشف متعدد الألوان ومضان نقل الطاقة الرنين (الإسفار نقل الطاقة الرنين (الحنق)، ملاحظة 1.2) عوائد عالية الكم وعمر مضان طويلة (الإسفار الغلة الكم (QY) وعمر (T) للاليكسا Fluor® الأصباغ الجدول 1.5) كفاءة الحنق عالية للغاية، مع احتساب R 0 بقيم تصل إلى 84 Å بين أزواج من الأصباغ اليكسا Fluor® (R العلامة & lt؛ 0 & GT؛ القيم لبعض اليكسا Fluor® الأصباغ الجدول 1.6) وحتى 77 Å بين الأصباغ اليكسا Fluor® وبعض nonfluorescent quenchers (R العلامة & lt؛ 0 & GT؛ قيم QSY وdabcyl quenchers جدول 1.11) الأصباغ اليكسا Fluor® تضع معايير جديدة لfluorophores وbioconjugates أعد منها. أطياف الامتصاص (الشكل 1.3.1 الشكل 1.3.2 الشكل 1.3.3) من هذه الأصباغ اليكسا فلوري متفوقة Fluor® 350، اليكسا Fluor® 405، اليكسا Fluor® 430، اليكسا Fluor® 488، اليكسا Fluor® 514، اليكسا Fluor® 532، اليكسا Fluor® 546، اليكسا Fluor® 555، اليكسا Fluor® 568، اليكسا Fluor® 594، اليكسا Fluor® 610، اليكسا Fluor® 633، اليكسا Fluor® 635، اليكسا Fluor® 647، اليكسا Fluor® 660، اليكسا Fluor® 680، اليكسا Fluor® 700، اليكسا Fluor® 750 واليكسا Fluor® 790 الأصباغ تمتد الطيف المرئي والأشعة تحت الحمراء (اليكسا Fluor® استرات ومجموعات نشطة لوصفها البروتينات والأحماض النووية الجدول 1.4) ومطابقة الإخراج الأساسي موجات من مصادر الإثارة المشتركة. لأن هناك الكثير من الأصباغ المختلفة اليكسا Fluor®، كان لدينا لوضع استراتيجية منهجية لتسمية لهم. نحدد هذه الأصباغ مع علامة تجارية مسجلة تبع اليكسا Fluor® من الطول الموجي الإثارة الأمثل في نانومتر. على سبيل المثال، اليكسا Fluor® 488 صبغ هو متحمس بشكل أمثل من 488 نانومتر الخط الطيفي ليزر الأرجون ليثيوم أيون. مع أطياف مطابق تقريبا لتلك التي فلوريسئين (الشكل 1.3.4)، ولكن مع أكبر بكثير مضان المترافقة وأفضل بكثير المترافقة صمود، اليكسا Fluor® 488 صبغ هو بلا منازع أفضل رد الفعل صبغ أخضر فلوري المتاحة. أطياف اليكسا Fluor® 555 الصبغة هي مباراة مثالية تقريبا لتلك التي CY3 صبغ (الشكل 1.3.9)، ولكن تقارن اليكسا Fluor® 555 الصبغة هي أكثر فلوري (الشكل 1.3.12) وأكثر صامد (الشكل 1.3.13) من تلك التي CY3 الصبغة. وبالمثل، أطياف اليكسا Fluor® 647 تقارن تتطابق إلى حد كبير تلك الصبغة Cy5 (الشكل 1.3.16) واليكسا Fluor® 680 واليكسا Fluor® 750 الأصباغ يحمل الخواص الطيفية مماثلة لتلك التي Cy5.5 وCy7 الأصباغ، على التوالي (الشكل 1.3.21 الشكل 1.3.22). تقارن جنبا إلى جنب للالطول الموجي الطويل اليكسا Fluor® الأصباغ مع R-فيكوإيريترين أو allophycocyanin (Phycobiliproteins-القسم 6.4) توسيع فائدة هذه السلسلة الصبغة في تدفق متعدد الإرسال الخلوي التطبيقات من خلال تحويل الانبعاثات phycobiliprotein الشخصي بالنسبة للقنوات الكشف المتاحة (الشكل 1.3.24 الشكل 1.3.25). الرقم 1.3.1 امتصاص الأطياف لدينا الأشعة فوق البنفسجية والتي تمتص الضوء الأزرق اليكسا Fluor® الأصباغ. الرقم 1.3.2 امتصاص الأطياف لدينا الخضراء، التي تمتص الضوء اليكسا Fluor® الأصباغ الصفراء والحمراء. الرقم 1.3.3 امتصاص الأطياف لدينا ممتصة للضوء اليكسا Fluor® الأصباغ بعيدا الحمراء والأشعة تحت الحمراء. اليكسا Fluor® 635 الصبغة، وهي متاحة مترافق إلى الأجسام المضادة، streptavidin وphalloidin، لا يتم تضمين هنا ولكن طيف الامتصاص لها هي مشابهة جدا لتلك التي اليكسا Fluor® 633 الصبغة. الأخضر الفلورسنت اليكسا Fluor® الأصباغ اليكسا Fluor® 488 صبغ: A البديل العليا فلوريسئين بناء على تجاربنا والمنشورات والنتائج المعلنة من قبل العملاء، اليكسا Fluor® 488 صبغ هو إلى حد بعيد أفضل فلوريسئين (FITC أو FAM) بديل متاح لمعظم التطبيقات (واليكسا Fluor® صبغ سلسلة-لاحظ 1.1). وربما هو أفضل صبغة متاح للكشف عن جزيء واحد من bioconjugates، لارتباط مضان الطيفي (الإسفار الارتباط الطيفي (FCS)، ملاحظة 1.3) وقياسات مضان الاستقطاب (الإسفار الاستقطاب (FP)، ملاحظة 1.4). هذه الصبغة الخضراء الفلورسنت يسلك العديد من المزايا الفريدة: مضان أطياف مطابق تقريبا لتلك التي فلوريسئين، مع ماكسيما الإثارة / انبعاث 495/519 نانومتر (الشكل 1.3.4) وعمر مضان من 4.1 نانو ثانية (عوائد الإسفار الكم (QY) وعمر (T) للاليكسا Fluor® الأصباغ الجدول 1.5) امتصاص قوي، مع معامل الانقراض أكبر من 65،000 سم -1 M -1 صمود أكبر بكثير من فلوريسئين (الشكل 1.3.5)، مما يتيح المزيد من الوقت للمراقبة والتقاط الصور () درجة الحموضة حساسة مضان بين درجة الحموضة 4 و 10 (الشكل 1.3.6) للذوبان في الماء، مع عدم وجود العضوية المشارك المذيبات في ردود الفعل وسم، مما يوحي بأن استر succinimidyl اليكسا Fluor® 488 حمض الكربوكسيلية (A20000. A20100) قد يكون كاشف المثالي لالأمينات وسم يتعرض البروتينات على سطح الخلية من الخلايا الحية الناتج متفوقة مضان في البروتين المترافقة، متجاوزا في ذلك أي البروتين المسمى fluorophore مماثل طيفيا آخرين، من بينهم تقارن فلوريسئين (الشكل 1.3.7) وتقارن Cy2 من الأجسام المضادة (الشكل 1.3.8) استر monosuccinimidyl اليكسا Fluor® 488 حمض الكربوكسيلية هو خليط من أيزومرين ومتاح في 1 ملغ أو 5 ملغ حجم وحدة (A20000. A20100). نقي isomerically 5 أيزومر اليكسا Fluor® 488 صبغ يتوفر أيضا على أكثر هيدروليكيا tetrafluorophenyl مستقرة (TFP) استر (A30005 A37563 A37570،.) (. A30052) وsulfodichlorophenol (SDP) استر. TFP وSDP استرات هي تحسنا عن succinimidyl استر (NHS استر أو SE) الكيمياء التي تستخدم عادة لتوصيل fluorophores أو (Hapten) الناشب إلى الأمينات الأولية من الجزيئات الحيوية. كل ثلاثة كيمياء التفاعل تنتج نفس السندات أميد قوية بين الصبغة أو ناشبة ومجمع الفائدة (انظر مخططات رد الفعل في مقدمة لأمين تعديل القسم 1.1)، ولكن TFP واسترات SDP هم أقل عرضة للتحلل المائي عفوية خلال ردود الفعل الاقتران. كلا اليكسا Fluor® 488 TFP حمض الكربوكسيلية استر واليكسا Fluor® 488 SDP استر مستقرة لعدة ساعات في درجة الحموضة الأساسية التي تستخدم عادة لردود الفعل حتى بالصمود استرات succinimidyl. اليكسا Fluor® 488 الكربوكسيلية TFP حمض استر هو صبغ الأمينات رد الفعل المدرجة في معظم مجموعات العلامات من أجل البروتينات والأحماض النووية وأليغنوكليوتيد] (أطقم لوسم البروتينات والأحماض النووية، القسم 1.2؛ استرات النشطة ومجموعات لوصفها البروتينات والأحماض النووية - الجدول 1.2. اليكسا Fluor® استرات ومجموعات نشطة لوصفها البروتينات والأحماض النووية جدول 1.4)، بما في ذلك اليكسا Fluor® 488 الميكروسكيل كيت وصفها البروتين (A30006)، اليكسا Fluor® 488 الأجسام المضادة وصفها كيت (A20181)، اليكسا Fluor® 488 بروتين كيت وصفها (A10235)، وARES اليكسا Fluor® 488 DNA وصفها كيت (A21665) وقليل النوكليوتيد أمين صفها كيت اليكسا Fluor® 488 (A20191). اليكسا Fluor® 488 الكربوكسيلية SDP حمض استر هو صبغ الأمينات رد الفعل المدرجة في APEX اليكسا Fluor® 488 الأجسام المضادة وصفها كيت (A10468).